Rapid detection of resistance in Mycobacterium tuberculosis: a review discussing molecular approaches

The last few years have seen the development of several molecular designs to search for mutations encoding resistance to antituberculous drugs in Mycobacterium tuberculosis . Most of these are highly efficient for RIF-r detection and are well adapted to search for the most relevant INH-R mutations. In this review, these new molecular approaches are explained and are presented according to the molecular strategies on which they are based. In this sense, techniques based on DNA-sequencing, electrophoresis and hybridization are reviewed and the newer designs based on real-time PCR and microarrays are also included. Molecular methods are sure to transform standard approaches to the issue of resistance in the mycobacteriology laboratory. This will allow laboratories to speed up the performance of resistance assays and provide access to essential information for highly refined detection, follow-up and management of antibiotic resistance in M. tuberculosis .     

重组人钙调素对白芷细胞增殖及结核杆菌生长的影响

目的 :探讨重组人钙调素 ( rh Ca M)对白芷悬浮细胞及结核杆菌增殖作用的影响。　方法 :用基因重组技术获得人钙调素基因 ( h Ca M c DNA)重组表达质粒 h Ca M / p BV2 2 0 ,将其转化大肠杆菌 DH5α。用 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物。将纯化 rh Ca M加入悬浮培养的白芷细胞及结核杆菌培养基中 ,观察 rh Ca M对其增殖作用的影响。　结果 :含 h Ca M / p BV2 2 0的重组菌经温度诱导可高效表达Ca M蛋白 ,经 15 % SDS-PAGE分析 ,可观察到一相对分子质量为 170 0 0的表达条带 ,Western blot结果证实 ,此表达条带可与标准鼠抗 Ca M Mc Ab起特异反应。每 1L菌液经 Phenyl-Sepharose CL -4 B疏水亲和层析法纯化可获Ca M纯品 3～ 4mg。rh Ca M对白芷细胞增殖作用影响的研究结果表明 ,rh Ca M在低细胞密度培养条件下对白芷细胞有促进增殖作用 ,效果高于标准植物 Ca M。本研究同时还发现一定浓度的纯化 rh Ca M( 1、10μg/ ml)可促进牛型结核杆菌的生长。　结论 :rh Ca M对植物细胞和细菌均有细胞外促增殖作用     

原位聚合酶链反应检测结核分枝杆菌L型的初步研究

目的：建立一种不需提取ＤＮＡ的检测分枝结核杆菌Ｌ型的分子生物学方法。方法：采用原位聚合酶链反应（原位ＰＣＲ）技术,扩增结核杆菌Ｌ型及其感染的人和小鼠血标本中的结核杆菌ＩＳ６１１０基因,再用免疫组化技术显色。结果：结核杆菌Ｌ型菌株中的ＤＮＡ被扩增,血标本中,可见到红细胞和淋巴细胞周围粘附大量结核杆菌ＤＮＡ阳性颗粒。结论;红细胞和淋巴细胞具有免疫粘附功能,原位ＰＣＲ快速、简便,可用于检测稳定和不稳定分     

结核分支杆菌耐多药株katG突变SSCP技术检测的研究

目的 建立并评价ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测结核分支杆菌耐药性基因突变的方法。方法 根据ｋａｔＧ基因易变区设计一对引物,ＰＣＲ扩增,产物经沸点断裂成单链,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,比较电泳的位置。结果 ＰＣＲ检测结核菌ＤＮＡ的灵敏度达到１００个细菌／ｍｌ,与其它细菌和其他分支杆菌无交叉反应。３０株敏感株和Ｈ３７Ｒｖ的ＰＣＲ产物经ＳＳＣＰ检测正常,２０株耐异烟肼结核菌中,１９株的ＰＣＲ产物ＳＳＣＰ检测游异常电泳带     

单链构象多态性分析技术检测结核杆菌利福平耐药基因

目的：研究本地区临床分离结核杆菌ｒｐｏＢ基因突变与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法：对３６株ＲＦＰ敏感株和４４株ＲＦＰ耐药株ｒｐｏＢ基因的３２８ｂｐ的ＰＣＲ扩增产物进行单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄ ｃｏｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＳＳＣＰ）分析。结果：３６株ＲＦＰ敏感株的ＳＳＣＰ带谱均与参考株Ｈ３７Ｒｖ相同,４４株ＲＦＰ耐药株中,２５株高度ＲＦＰ耐药株和１１株低度ＲＦＰ耐药株的ＳＳＣＰ带谱与Ｈ３７Ｒｖ带谱有差异;另８株低度ＲＦＰ耐药株的ＳＳＣＰ带谱与Ｈ３７Ｒｖ带谱相同。结论：ＳＳＣＰ分析可检测出ｒｐｏＢ基因突变,该基因突变与本地区临床分离结核杆菌对ＲＦＰ耐药有关。     

The BCG controversy

The history of tuberculosis control by vaccination with Bacille Calmette-Guérin (BCG) is reviewed. Use of the vaccine is evaluated in light of conflicting results from trials of BCG efficacy. Explanatinations are suggested for the variations between trials, and the continued use of BCG as a vaccine against tuberculosis is discussed.     

7种蛇毒小肽对临床分离耐（多）药结核分枝杆菌的体外活性研究

 目的检测7种从蛇毒分离的小肽是否对临床分离的耐药性结核分枝杆菌菌株具有活性。方法放射性方法检测蛇毒小肽对结核分枝杆菌的最小抑制浓度，细菌存活计数确证放射性方法的结果。结果7种蛇毒小肽对耐药性结核分枝杆菌菌株都有活性。其MIC值分别为(μg·mL_-1)：Opiophagus hannah 5.4，Naja atra 8.6，Bungarus fasciatus 6.4，Trimeresurus stejnegri 12.6，Protobothrops mucrosquamatus 11.8，Protobothrops jerdonii 7，Agksistrodon halys 4.2。结论这些结果是首次报道，为进一步设计和开发新来源的抗结核病新药提供了依据。     

复合PCR-膜芯片技术对结核分枝杆菌链霉素耐药性的快速检测

目的　应用复合聚合酶链反应 (复合 PCR) -膜芯片技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 ( SM)的耐药性。方法　设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐 SM基因 rps L和 rrs的寡核苷酸探针制作膜芯片 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的 rps L和 rrs基因复合 PCR产物进行反向斑点杂交 ,并与 PCR-单链构象多态性 ( PCR- SSCP)和 PCR-直接测序 ( PCR- DS)结果比较。结果　 5 2株结核分枝杆菌临床分离株中 ,9株敏感株rps L和 rrs基因的 SSCP图谱、膜芯片杂交结果与标准株完全相同 ;4 3株耐 SM菌株中 ,33株存在 rps L 基因4 3位密码子 AAG→ AGG突变 ,5株有 rrs基因 5 13位 A→C突变 ,1株有 rrs基因 5 13位 A→ T突变 ,突变率为 90 .7%。结论　膜芯片技术检测结核分枝杆菌耐 SM基因型灵敏度高、特异性强、简便、快速 ,可用于临床耐药性检测     

血清结核杆菌抗体检测在呼吸道感染鉴别诊断中的意义

为探讨血清特异性结核抗体的辅助诊断价值和加强对小儿肺炎的鉴别诊断，采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法，对１５７７例肺炎患儿、６８５例健康儿童及１１１例支气管淋巴结结核患儿进行了血清特异性结核抗体检测，用纯蛋白衍生物皮试作对照，肺炎组还作了结核杆菌ＰＣＲ检查。结果表明，结核组患儿的结核抗体阳性８４例（７５．７％），健康组儿童的结核抗体阳性２４例（３．５％），肺炎组的结核抗体阳性２６２例（１６．６％），肺炎组与健康组比较，ｕ＝８．６３，Ｐ＜０．０１。符合儿童结核诊断者３９例，占受检病例的２．５％，占结核抗体阳性病例的１４．９％。ＥＬＩＳＡ法的敏感性为０．７５７、特异性为０．９６５、符合率为０．９３６、阳性预测值为０．７７８、阴性预测值为０．９６１、精确性为０．７２２，９５％可信限为０．６１２～０．８３２之间。提示检测结核抗体有重要辅助诊断价值；肺炎患儿的结核感染率远高于健康组，故应高度警惕，在肺炎患儿中发现结核病患儿，并将其作为重点防治对象。     

克隆病与副结核杆菌

分支杆菌、尤其是副结核杆菌长期被疑为克隆病的致病菌。采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对手术及内镜活检的７４例石蜡包埋组织（３６例克隆病、１８例溃疡性结肠炎和２０例非炎性肠病对照组织）中的副结核杆菌ＤＮＡ进行检测。扩增的靶ＤＮＡ为副结核杆菌染色体特异重复插入序列ＩＳ９００上４００ｂｐ的片段。其产物特异性通过生物素标记的副结核杆菌全染色体探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实。结果显示：４７．２％的克隆病、１１．１％的溃疡性结肠炎和１５．０％的非炎性肠病对照组织中检出了副结核杆菌ＤＮＡ，并发现克隆病组织中副结核杆菌的检出率与其病变部位和是否存在肉芽肿病变无关。提示部分克隆病组织中确有副结核杆菌存在，且后者与克隆病间可能存在特殊相关性。